АНАЛИЗ МИКОТОКСИНОВ: СЛОЖНАЯ И ВАЖНАЯ ЗАДАЧА В ОБЛАСТИ ПИТАНИЯ ЖИВОТНЫХ

BIŌNTE TECHNICAL DEPARTMENT

Количественное определение микотоксинов в кормах и сырье чрезвычайно сложная задача, поскольку они встречаются в очень низких концентрациях.

Микотоксины представляют собой вторичные токсичные метаболиты, производимые грибковыми видами, которые загрязняют пищевые продукты и корма. Растущее влияние микотоксинов во всем мире является неизбежной проблемой, оказывающей негативное воздействие как на здоровье животных, так и на здоровье человека. Обязательство соблюдать нормативные ограничения требует разработки высокоэффективных аналитических методов для выявления, идентификации и количественного определения этих веществ в пищевых продуктах и кормах.

В настоящее время высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) является одним из наиболее широко используемых методов для определения микотоксинов из-за его высокой надежности и чувствительности, но на рынке также доступны экспресс-наборы. разработаные в соответствии с их назначением и применимостью.

Необходимо учитывать, что независимо от выбранного метода анализа, решающим показателем для контроля микотоксинов является высокая неравномерность их распределения в пределах одного и того же образца. По этой причине отбор образцов становится одним из самых важных этапов для проведения надежного анализа на микотоксины. Это связано с тем, что микотоксины распределены в продукте неравномерно, что еще больше затрудняет проведение показательных и надежных анализов.

Методы анализа микотоксинов

Для анализа микотоксинов было разработано множество аналитических методов. Их можно разделить на две основные группы: хроматографические методы и экспресс-методы.

Хроматографические методы (ВЭЖХ-МС)

Установлен факт, что многократное загрязнение различными микотоксинами в низких концентрациях наиболее часто встречается в продуктах питания и сырье. Благодаря использованию хроматографических методов и, в частности, ВЭЖХ-МС (высокоэффективная жидкостная хроматография в сочетании с масс-спектрометрическим детектором) возможна одновременная идентификация и количественное определение различных микотоксинов в сложных образцах и при очень низких концентрациях.

После отбора образцов аналитическая процедура определения микотоксинов в пищевых продуктах и/или сырье включает ряд предварительных этапов, прежде чем образцы могут быть проанализированы:

Вначале необходимо подготовить образец, чтобы создать идеальные условия для работы. Этот процесс может включать в себя, среди прочего, процессы сублимационной сушки, дробления и просеивания.

После подготовки образца следует этап экстракции, а затем этап очистки. Эти этапы предусматривают извлечение микотоксинов из образца, используя различные процессы и растворители (органические и водные), а затем их очистку, чтобы получить максимально чистый экстракт для анализа (Amelin et al., 2013).

Обычно эти две последние стадии аналитического процесса являются наиболее трудными, поскольку из-за сложности образцов необходима хорошая оптимизация задействованных параметров для получения надежного и точного аналитического метода.

Наконец, образец вводится в оборудование со всеми оптимизированными параметрами.

Метод анализа ВЭЖХ-МС является наиболее надежным и чувствительным для идентификации и количественного определения микотоксинов в образцах кормов и/или сырье. Более того, все эти методы полностью автоматизированы и выполняются в высокоспециализированных лабораториях. С другой стороны, хотя эти методы дают полноценные и надежные результаты, они являются относительно дорогими анализами и требуют наличия квалифицированного оборудования и персонала.

Быстрые методы

Эта категория методов позволяет проводить быстрый анализ с небольшими инструментальными требованиями. В большинстве своем они основаны на методах иммунодетекции и часто очень полезны для скрининга на комбикормовых заводах, которые позволяют анализировать большое количество образцов.

К ним относится количественный метод ELISA (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay) по его аббревиатуре на английском языке. Этот метод основан на выявлении антигена, иммобилизованного на твердой фазе с помощью антитела, которое под действием фермента вызывает реакцию, результат которой может быть измерен, например, спектрофотометрически. Этот метод универсален, надежен, прост и использует недорогие реагенты.

Другой метод иммуноанализа — тест с боковым потоком (LFT, Lateral Flow Test) или тест с иммунохроматографической полоской для количественного определения микотоксинов. Этот метод предполагает добавление экстракта образца к буферному раствору, а полученный раствор добавляется на тест-полоску с боковым потоком. Эта полоска инкубируется в течение короткого периода времени и проверяется с помощью считывающего устройства.

Эти методы просты, недороги, а результаты достигаются за короткий промежуток времени. Кроме того, для их использования не требуется привлечение специализированного персонала. Однако эти методы требуют дальнейшего анализа методом ВЭЖХ-МС для подтверждения, поскольку в зависимости от анализируемой матрицы иммуноанализ может давать неточные и/или недостоверные результаты (Kolossova et al., 2009).

Mycotoxins quantification in feed and raw materials is extremely challenging because they are found in very low concentrations

Mycotoxins are toxic secondary metabolites produced by fungal species which contaminate raw materials and feed. The prevalence of mycotoxins worldwide supposes an outstanding challenge that has a negative impact on both animal and human health. The obligation to comply with regulation limits requires developing highly effective analytical techniques to detect, identify and quantify these compounds in feed and raw materials.

Nowadays, high performance liquid chromatography (HPLC) is one of the most widely used techniques for mycotoxins detection due to high reliability and sensitivity, but there are also, and increasingly, rapid test kits in the market designed according to their purpose and application.

Детоксикатор микотоксина